微量STR Mix
NuHi® SU9 PCR Mix 货号:NH9347
NuHi® SU10 PCR Mix 货号:NH9348
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产品介绍
该产品适合多种类型PCR基因检测。本品可扩增含有腐殖酸，血红素等抑制强的复杂样本。
NuHi® SU9 PCR Mix 和NuHi® SU10 PCR Mix包含的热启动DNA聚合酶具有5'→3'的聚合酶活性，不具有5'→3'核酸外切酶和3'→5'的外切酶功能。适用于微量样本的STR检测。
产品特点
峰型均一
灵敏度高 模板量可低至20拷贝
采集卡兼容性好 可以兼容市面所有样本采集卡
有效抗抑制 避免扩增状态前高后低的情况
扩增效率高 优良的整体扩增效率和部分特殊模板扩增效率
产品稳定性好 严格内控，批间差异小
微量样本检测（十拷贝）
Mix1与VFP 对比mix用VFP引物:0.03125 10copy
Mix1与VFP 对比mix用VFP引物:0.0625 20copy
Mix1与VFP 对比mix用VFP引物:0.125 40copy
1. 常见的扩增效率异常有哪些，如何解决？
(1) 扩增片段：信号太弱，经系统矫正后产生。建议提高模板浓度重复实验。
(2) 扩增片段加A不好：适当延长加A时间。
2. 阴性对照出现明显扩增
(1) 反应体系污染。更换新的Mix、水、引物重复实验。反应体系在超净工作台内配制，减少气溶胶污染。
(2) 扩增为引物二聚体引起。需配合融解曲线进行分析。
3. 扩增效率低
(1) 扩增效率极低。优化反应条件，尝试三步法扩增程序，或者重新设计合成引物。
(2) 模板浓度太低。减少稀释度重复实验，一般未知浓度的样品先从最高浓度做起。
(3) 模板降解。重新制备模板，重复实验。
(4) PCR产物太长。推荐PCR产物长度为80 bp-500 bp。
(5) 体系中存在PCR抑制剂。一般为模板带入，加大模板稀释倍数或者重新制备模板重复实验。
4. 反应结束无扩增片段出现
(1) 模板浓度太低。减少稀释度重复实验，一般未知浓度的样品先从高浓度做起。
(2) 模板降解。重新制备模板，重复实验。
(3) 反应循环数不够。一般设置循环数为26-30，但需要注意的是过多的循环会增加过多的背景信号，降低数据可信度。
(4) 确认引物是否降解。长时间未使用的引物应先通过PAGE电泳检测完整性，以排除引物降解的可能性。
5. 实验重复性差
(1) 加样体积失准。使用准确度较好的移液枪，扩大反应体积，将模板做高倍稀释，以大体积加入反应体系中。
(2) PCR仪不同位置温度控制不一致。定期校准仪器。
(3) 模板浓度太低。模板浓度越稀，重复性越差，减少模板稀释度或提高加样体积。
6. 如何预防气溶胶污染？
在加样的时候要小心操作，尽量在超净工作台中进行加样，并注意通风。扩增反应结束后，尽量不要打开产物的管盖，不要跑胶。如果气溶胶污染情况很严重，建议采用通风结合含强氧化剂的消毒液进行处理。或者选用抗污染版本试剂进行实验，可大幅减少气溶胶带来的污染。
7. 模板的稀释液选择
稀释模板可以使用购买的Nuclease-free water、DEPC水或者实验室自备的ddH2O等。TE里如果EDTA超过0.1mM不建议使用TE稀释模板。