微量STR Mix

NuHi® SU9 PCR Mix     货号:NH9347

NuHi® SU10 PCR Mix   货号:NH9348


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产品介绍

该产品适合多种类型PCR基因检测。本品可扩增含有腐殖酸,血红素等抑制强的复杂样本。
NuHi® SU9 PCR Mix 和NuHi® SU10 PCR Mix包含的热启动DNA聚合酶具有5'→3'的聚合酶活性,不具有5'→3'核酸外切酶和3'→5'的外切酶功能。适用于微量样本的STR检测。


产品特点

峰型均一  

灵敏度高 模板量可低至20拷贝

采集卡兼容性好  可以兼容市面所有样本采集卡

有效抗抑制  避免扩增状态前高后低的情况

扩增效率高  优良的整体扩增效率和部分特殊模板扩增效率

产品稳定性好  严格内控,批间差异小


微量样本检测(十拷贝)

10拷贝0.03125.png


Mix1与VFP 对比mix用VFP引物:0.03125  10copy

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Mix1与VFP 对比mix用VFP引物:0.0625   20copy

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Mix1与VFP 对比mix用VFP引物:0.125  40copy

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微信图片_20200430155608.jpg


1. 常见的扩增效率异常有哪些,如何解决?

 (1) 扩增片段:信号太弱,经系统矫正后产生。建议提高模板浓度重复实验。

 (2) 扩增片段加A不好:适当延长加A时间。


2. 阴性对照出现明显扩增

 (1) 反应体系污染。更换新的Mix、水、引物重复实验。反应体系在超净工作台内配制,减少气溶胶污染。

 (2) 扩增为引物二聚体引起。需配合融解曲线进行分析。


3. 扩增效率低

(1) 扩增效率极低。优化反应条件,尝试三步法扩增程序,或者重新设计合成引物。

(2) 模板浓度太低。减少稀释度重复实验,一般未知浓度的样品先从最高浓度做起。

(3) 模板降解。重新制备模板,重复实验。

(4) PCR产物太长。推荐PCR产物长度为80 bp-500 bp。

(5) 体系中存在PCR抑制剂。一般为模板带入,加大模板稀释倍数或者重新制备模板重复实验。


4. 反应结束无扩增片段出现

(1) 模板浓度太低。减少稀释度重复实验,一般未知浓度的样品先从高浓度做起。 

(2) 模板降解。重新制备模板,重复实验。

(3) 反应循环数不够。一般设置循环数为26-30,但需要注意的是过多的循环会增加过多的背景信号,降低数据可信度。

(4) 确认引物是否降解。长时间未使用的引物应先通过PAGE电泳检测完整性,以排除引物降解的可能性。


5. 实验重复性差

(1) 加样体积失准。使用准确度较好的移液枪,扩大反应体积,将模板做高倍稀释,以大体积加入反应体系中。

(2) PCR仪不同位置温度控制不一致。定期校准仪器。

(3) 模板浓度太低。模板浓度越稀,重复性越差,减少模板稀释度或提高加样体积。


6. 如何预防气溶胶污染?

 在加样的时候要小心操作,尽量在超净工作台中进行加样,并注意通风。扩增反应结束后,尽量不要打开产物的管盖,不要跑胶。如果气溶胶污染情况很严重,建议采用通风结合含强氧化剂的消毒液进行处理。或者选用抗污染版本试剂进行实验,可大幅减少气溶胶带来的污染。


7. 模板的稀释液选择

稀释模板可以使用购买的Nuclease-free water、DEPC水或者实验室自备的ddH2O等。TE里如果EDTA超过0.1mM不建议使用TE稀释模板。