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产品介绍
本制品是采用SYBR Green染料法进行Real Time PCR的专用试剂。
本制品包含:经化学修饰的Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、经优化后的缓冲液等扩增必需组分(模板、探针与引物除外)。制品中的DNA聚合酶是经化学修饰的Hot Start法DNA聚合酶,与精心研制的Real Time PCR用Buffer组合使用,可以有效抑制体系中非特异性PCR扩增,大大提高PCR的扩增效率,进行高灵敏度的Real Time PCR扩增反应。
产品特点
激活时间短:激活时间降至5min,PCR净时间65 min
特异性强:有效抑制引物二聚体
灵敏度高:低至6拷贝均可扩增
通用性强:300bp长度片段,65%GC含量均可高效扩增
信号更高:更高性噪比,扩增曲线更美观
稳定性强:放置8天Ct及特异性无变化
规格
2×,5ml/瓶,50ml/瓶,500ml/瓶
储存条件
在使用前推荐-20℃保存,在使用后推荐4℃避光保存,避免反复冻融。
适用仪器
NuHi® Robustic SYBR Green Mix中含有特殊的ROX参比染料,适用于所有荧光定量PCR仪。
推荐反应程序
*1激活时间为2min。延长激活时间时,扩增特异性会降低。
*2在扩增高GC含量片段时,可适当增加变性时间至15-30秒。
*3退火延伸时间,可根据所扩增片段长度及荧光定量PCR仪器做适当调整。扩增片段长度300bp以内,推荐退火延伸时间25秒。
*4溶解曲线分析程序,可根据不同机器或需要进行调整。
Q-2. 扩增曲线不正常
a) 扩增曲线不光滑:信号太弱或扩增效果过低,需提高模板浓度重复
Q-3. Ct值过大
a) 扩增效率低:优化反应条件,尝试三步法扩增程序,或者重新设计引物或探针
Q-4. SNP分型点分布不理想
a) 扩增效率低:优化反应条件,尝试三步法扩增程序,或者重新设计引物探针
Q-5. 阴性对照NTC有扩增
a) 反应试剂被污染:更换新批次试剂并在有条件情况下更换实验场地重复试验
Q-6. 标准曲线线性关系不理想
a) 加样误差:加大模板稀释倍数,提高加样体积,减少加样误差
Q-7. SG溶解曲线多峰
a) 引物设计非特异:根据设计原则设计新的引物
Q-8. 实验重复性差
a) 仪器状态不佳:定期校准仪器
Q-9. 产品稳定性如何
a) 产品-20℃保存有效期1年,4℃保存有效期1个月