案件多重PCR Mix

NuHi® SU9 PCR Mix    货号:NH9347

NuHi® SU10 PCR Mix   货号:NH9348

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产品介绍

新海SU PCR Mix系列试剂盒是主要面向法医领域应用的Premix试剂,扩增产物可用于后续测序以及STR检测。多产品梯度满足法医建库,亲子鉴定和案件样本等各类场景需求。对多重扩增的良好支持使单管试剂能够稳定扩增目前所需的所有位点。

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产品性能

完美的多重扩增性能

新海SU PCR Mix系列试剂盒具有特异性高的特点,可以无偏差的扩增多个目的片段,且扩增效率均一,对高AT、GC区域有同等的扩增效率。微量检测版Mix(NH9347/NH9348)具有极高的扩增灵敏度,面对样本量极低的法医检材时,仍能有出色的表现。


高特异性:以人类基因组DNA为模板,使用41个Y染色体STR位点的六色荧光标记引物,进行多重PCR扩增,得到41个位点的全部有效等位基因,在70-500bp检测范围内,未产生任何非特异性扩增,且全部41个位点扩增效率基本相当。

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高灵敏度:使用新海SU PCR Mix系列试剂盒(图中MIX 1)与ABI VeriFiler Plus(图中VFP)系列进行低拷贝样本对比实验,使用VFP系列配套引物,检测10拷贝左右DNA样本。

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出色的样本兼容范围

新海SU PCR Mix系列试剂盒对血红素,腐殖酸等常见的PCR抑制物有着出色的耐受力。不仅可以兼容市面所有的样本采集卡,对新鲜血液等常见样本也有较强的扩增能力,可进行样本免提取直扩;进行微量样本扩增时,能够避免扩增状态前高后低的情况。

1、不同腐殖酸浓度的STR检测,腐殖酸浓度为250ng/ul时,位点检出率为100%。

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2、不同血红素浓度STR检测,血红素浓度为500uM/ul时,位点检出率为100%。

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专业的试剂定制服务

试剂定制优化:新海生物拥有丰富的酶及扩增体系优化经验,可以根据您的引物等其他条件对Mix进行优化,帮助您构建最佳的反应体系。

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试剂冻干服务:新海目前可提供试剂冻干服务,试剂经冻干技术处理,稳定性出色,可常温储运,节约高昂的冷链成本;冻干试剂即时复水活化,性能保存完整;支持大体积加样,灵敏度更高。

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使用冻干版新海多重PCR Mix检测1ng标准DNA,随后将冻干试剂常温储存30天后再次检测相同样品,检测结果与第一天无差别。

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产品货号

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1、常见的扩增效率异常有哪些,如何解决?

(1) 扩增片段:信号太弱,经系统矫正后产生。建议提高模板浓度重复实验。

(2) 扩增片段加A不好:适当延长加A时间。

2、阴性对照出现明显扩增

(1) 反应体系污染。更换新的Mix、水、引物重复实验。反应体系在超净工作台内配制,减少气溶胶污染。

(2) 扩增为引物二聚体引起。配合融解曲线进行分析。

3、扩增效率低

(1) 扩增效率极低。优化反应条件,尝试三步法扩增程序,或者重新设计合成引物。

(2) 模板浓度太低。减少稀释度重复实验,一般未知浓度的样品先从最高浓度做起。

(3) 模板降解。重新制备模板,重复实验。

(4) PCR产物太长。推荐PCR产物长度为80 bp-500 bp。

(5) 体系中存在PCR抑制剂。一般为模板带入,加大模板稀释倍数或者重新制备模板重复实验。

4、反应结束无扩增片段出现

(1) 模板浓度太低。减少稀释度重复实验,一般未知浓度的样品先从高浓度做起。 

(2) 模板降解。重新制备模板,重复实验

(3) 反应循环数不够。一般设置循环数为26-30,但需要注意的是过多的循环会增加过多的背景信号,降低数据可信度。

(4) 确认引物是否降解。长时间未使用的引物应先通过PAGE电泳检测完整性,以排除引物降解的可能性。

5、实验重复性差

(1) 加样体积失准。使用准确度较好的移液枪,扩大反应体积,将模板做高倍稀释,以大体积加入反应体系      中。

(2) PCR仪不同位置温度控制不一致。定期校准仪器。

(3) 模板浓度太低。模板浓度越稀,重复性越差,减少模板稀释度或提高加样体积。

6、如何预防气溶胶污染

在加样的时候要小心操作,尽量在超净工作台中进行加样,并注意通风。扩增反应结束后,尽量不要打开产物的管盖,不要跑胶,跑完后需要妥善处理。如果气溶胶污染情况很严重,建议采用通风结合含强氧化剂的消毒液进行处理。或者选用抗污染版本试剂进行实验,可大幅减少气溶胶带来的污染。

7、模板的稀释液选择

稀释模板可以使用购买的Nuclease-free water、DEPC水或者实验室自备的ddH2O等。TE里如果EDTA超过0.1mM不建议使用TE稀释模板。使用DEPC水确保DEPC去除干净。